|
|
|
Главная --> Справочник терминов Проявления хроматограммы Для проявления биологической активности некоторые белки должны сначала образовать макрокомплекс, состоящий из нескольких третичных структур белковых субъединиц, которые связаны вторичными валентными силами (ионное притяжение, водородные связи). Подобные способы пространственной организации нескольких полипептид-иых субъединиц - это четвертичная структура белка, которая определяет степень ассоциации третичных структур в биологически активном материале. Например, белком с четвертичной структурой является гемоглобин, который состоит из четырех субъединиц (клубков) миогло-бина - двух молекул а-гемоглобина, каждая из которых содержит гем. Для проявления биологической активности некоторые белки должны сначала образовать макрокомпяекс, состоящий из нескольких третичных структур белковых субъединиц, которые связаны вторичными валентными силами (ионное притяжение, водородные связи). Подобные способы пространственной организации нескольких полипептидных субъединиц - это четвертичная структура белка, которая определяет степень ассоциации третичных структур в биологически активном материале. Например, белком с четвертичной структурой является гемоглобин, который состоит из четырех субъединиц (клубков) миогло-бина - двух молекул а-гемоглобина, каждая из которых содержит гем. ЧЕТВЕРТИЧНАЯ СТРУКТУРА. Для проявления биологической активности некоторые белки должны сначала образовать макрокомплекс (олиго- Для проявления биологической активности некоторые белки до- ется достаточным условием проявления биологической активности. В работе [46] проявления биологической активности. которой необходимо для проявления биологической активности [53]. Если вместо В реакциях SE электрофил направляется преимущественно в положения 4 и 5 (нитрование) или 2, 4 и 5 (бромирова-ние). Так же как и пиразолы, имидазолы относительно устойчивы к окислению и восстановлению. Имидазольный цикл играет важную роль для проявления биологической активности таких соединений, как аминокислота гистидин и биогенный амин гистамин. Все оксипиримидины обнаруживают способность к про-тотропной таутомерии, заключающейся в миграции протона между структурами гидроксидиазина и кетоформы (лактим-лактамная таутомерия), причём для барбитуровой кислоты рентгеноструктурный анализ показал преобладание трикето-формы (см. выше на примере формулы веронала). Аналогичное свойство характерно и для аминопиримидинов. Возможность существования этих производных пиримидина в кето-формах особенно существенна для проявления биологической активности так называемых пиримидиновых оснований нуклеиновых кислот - тимина, урацила и цитозша, так как только в кето-форме возможно образование сильных водородных связей между остатками оснований в цепях нуклеиновых кислот (ти-мин - аденин и цитозин - гуанин в ДНК, урацил - аденин и цитозин - гуанин в РНК): Конфигурация асимметрического центра аминокислот имеет существенное значение для проявления биологической активности как самих аминокислот, так и более крупных молекул, в состав которых входят аминокислоты. Оптическая чистота остатков аминокислот сильно сказывается на биологических свойствах олиго- и полимерных соединений, мономерами которых служат остатки аминокислот (эти соединения называются пептидами). Многие лекарственные формы пептидной природы получают, модифицируя природный пептид D-аминокислотами с целью пролонгирования действия препарата, так как пептиды с D-аминокислотами становятся менее подверженными разрушающему действию пептидаз, "узнающих" только остатки L-аминокислот. Введение D-аминокис-лоты в пептид может, в зависимости от места модификации, пролонгировать активность или уничтожить её, а в ряде случаев такое изменение структуры сообщает пептиду новую биологическую активность. спектрах (1680—1600 см"1). В некоторых типах лактамов делокали-зованная система нарушается. Чаще всего это происходит для соединений, в которых атом азота находится в голове моста. Например, в лактаме 11 неподелеиная пара электронов атома азота почти ортогональна т-связи карбонильной группы и не может эффективно взаимодействовать с ней. Вследствие этого соединение обладает очень высокой основностью (рА. = 5,33, тогда как для простых ненапряженных амидов рА, = 0) и частота поглощения карбонильной группы значительно выше обычной (1762 см~') [24]. В циклической системе пенициллина 12 мостиковый азот неплоский, так как sp2-гибридизованный атом азота значительно увеличивал бы угловое напряжение в циклической системе. Частота поглощения карбонильной группы пенициллина (1780—1770см"1) выше, чем для других азетидинонов (1765—1745 см"1), и эта группа легко подвергается атаке нуклеофилов. Было высказано предположение, что антибиотическая активность пенициллина, возможно, связана с повышенной электрофильиостью карбонильной группы. Однако наличие би-циклической структуры ие обязательно для проявления биологической активности, поскольку моноциклические аналоги, карбонильная группа которых не столь активна, также проявляют аналогичную активность (см. разд. 9.8). Состоятельность концепции резонансной стабилизации амидов до сих пор подвергается сомнению; были предложены альтернативные объяснения повышенной Реакционной способности непланарных лактамов [25]. В самой ранней работе Андерсона и сотр.1 хроматографирование проводили на двух бумажных полосках (ватман № 1). Пробу наносили на бумагу в виде раствора в ацетоне. Для элюирования использовали воду и четыреххлористый углерод; для проявления хроматограммы — раствор фторбората л-нитробензол-диазония. Количество примеси рассчитывали, замеряя площадь ее пятна и сравнивая с площадью пятна стандартного раствора. Для определения примесей, содержащихся в количестве менее 1% , их сначала концентрировали 5— 6-кратной перекристаллизацией из горячего хлорбензола. Авторам удалось выделить и идентифицировать три примеси: орто-пара-изомер дифенилолпропана, соединение Дианина и трис-фенол I. По способу3 для разделения примесей пробу раствора дифенилолпропана в этаноле наносили на лист ватмана № 1, пропитанный водой; в качестве растворителя использовали четыреххлористый углерод, насыщенный муравьиной кислотой. Хроматографирование вели нисходящим способом; для проявления хроматограммы использовали свежеприготовленную смесь водных растворов феррицианида калия и хлорного железа. Количественное определение проводили с помощью хроматометра Ланге (хроматограмму парафинировали, а затем измеряли интенсивность окраски пятен и сравнивали с калибровочным графиком). Применяли также и более простой метод, не требующий указанного прибора — метод сравнения интенсивности окраски в исследуемой и эталонной пробах. Помимо орто-пара-изомера дифенилолпропана, соединения Дианина и трис-фенола I удалось обнаружить 10 неидентифицированных примесей. На основании величины Rf авторы предполагают, что три компонента из десяти являются фенолами с одной группой •—ОН. При ионообменной хроматографии можно добавить в колонку больше растворителя, так как чистые неионизированные растворители не вызывают расширения зон. По этой же причине можно вводить также разбавленные исследуемые растворы и концентрировать их на сорбенте. Для проявления хроматограммы применяют растворитель, под действием которого зоны перемещаются вниз по слою сорбента с небольшой скоростью. Пока пятна высыхают, подготавливают сосуд для проявления хроматограммы. Таким сосудом может быть стакан, высота которого на 4—5 см больше длины пластинки. В этот стакан помещают свернутую в трубку фильтровальную бумагу; эта бумага должна располагаться по краям стакана, касаться дна и не доходить на 5—б см до его верха; края бумаги не должны соприкасаться друг с другом. После этого наливают в стакан бензол таким образом, чтобы толщина его слоя на дне составляла около 5 мм, закрывают часовым стеклом и дают бумаге пропитаться растворителем. Когда уровень бензола на дне стакана перестанет убывать, добавляют новую порцию бензола, чтобы толщина его слоя на дне снова составила 5 мм. Обработка хроматограмм. Пластинки после хроматографирова-ния высушивают на воздухе. Положение пятен некоторых бесцвет-рых веществ можно установить при рассмотрении пластинок в УФ-свете". В большинстве случаев удается сделать хроматогра-фические пятна видимыми путем обработки их парами иода2). Вещество проявляется в виде коричневого пятна или (реже) при-длительном действии паров иода в виде белого пятна на темном фоне. Для проявления хроматограммы применяют, кроме тотог обработку парами брома, опрыскивание соответствующими реагентами^ (конц. серная кислота, хромовая кислота, раствор перман-га-ната калия в серной кислоте и др.) или обугливание (нагревание пластинки при 300—400 °С). Пластинки с незакрепленным слоем целесообразно опрыскивать влажными, так как при опрыскивании их в сухом состоянии незакрепленный слой адсорбента может быть легко разрушен. двигается оно по колонке в процессе проявления хроматограммы. используют затем для проявления хроматограммы. Если компоненты адсорбента, выдавленный из колонки после проявления хроматограммы, окончании проявления хроматограммы, которую приходится проводить По окончании проявления хроматограммы растворителю дают пол- Растворитель, применяемый для проявления хроматограммы, наливают  Присутствии подходящих Присутствии порошкообразной Присутствии растворенного Присутствии различных Присутствии сернокислой Присутствии сероводорода Присутствии соответствующего Присутствии свободных Периодически встряхивают |
- |
Навигация