|
|
|
Главная --> Справочник терминов Противоточного распределения Ввиду того, что различия в растворимостях полипептидов очень невелики, для выделения индивидуальных пептидов из смесей требуются специальные методы. К ним относятся: фракционный диализ, распределительная хроматография (например, на колонке из бумажного порошка или листе бумаги), адсорбционная хроматография, ионнообменная хроматография, электрофорез и противоточное распределение по Крэйгу (т. е. распределение между двумя ограниченно смешивающимися жидкостями). Для характеристики выделенных пептидов и доказательства их однородности применяют противоточное распределение, количественный анализ аминокислотного состава и определение концевых групп полипептидной цепи. 7. ЭКСТРАКЦИЯ И ПРОТИВОТОЧНОЕ РАСПРЕДЕЛЕНИЕ противоточное распределение — вещество экстрагируют противо-точным методом с перераспределением его между двумя жидкими фазами. Противоточное распределение В отличие от других методов экстракции противоточное распределение позволяет разделять и идентифицировать вещества с очень близким коэффициентом распределения. Общие правила работы. Нагревание и охлаждение, кристаллизация, сушка и упаривание, фильтрование, экстракция и противоточное распределение, перегонка, работа с вакуумом и под давлением, возгонка, методы работы с полумикроколиче-ствами. Основы хроматографического разделения веществ, хроматографические методы. Идентификация органических веществ: определение температуры плавления, тепературы кипения, плотности. Качественный элементный и функциональный анализ. Применение ИК- и УФ-спектроскопии и спектроскопии ПМР для идентификации органических соединений. Понятие о применении газовой хроматографии и масс-спектрометрии для идентификации веществ. Номенклатура ЮПАК. 7. Экстракция и противоточное распределение... 34 Противоточное распределение ... 38 31.28 Пептидный гормон окситоцин. — Задняя доля гипофиза вырабатывает ряд гормонов, два из которых были выделены в чистом виде. Один из них, окситоцин, стимулирует гладкую мускулатуру матки; другой, вазопрессин — антидиуретовый гормон, обладающий прессорной активностью. Эти два гормона настолько близки по физическим свойствам, что долгое время их считали одним веществом, обладающим широким спектром активности. Однако применением фракционного осаждения, хроматографии и электрофореза удалось их частично разделить (1928—1944). Применив противоточное распределение для продажного экстракта, имеющего окситоциновую активность 20 ед/мг, Дю Виньо1 (1949) получил значительно более чистый 31.32а Каллидин и брадикинин. — В 1937 г. Верле сообщил о пептиде, который образуется при действии фермента калликреина на кровяную плазму и стимулирует гладкую мускулатуру. Этот пептид известен в настоящее время под названием каллидина. В 1949 г. фармаколог Роха-э-Сильва обнаружил другой пептид, брадикинин, имеющий такие же фармакологические свойства, как и каллидин. Брадикинин выделяется из плазматического глобулина под действием яда бразильской змеи Bothrops jararaca или кристаллического трипсина. Брадикиноген и калл-идиноген идентичны аг-глобулинам. Название брадикинина (греч. bradys — медленный) обязано типу действия пептида на кишечник морской свинки, наиболее чувствительный орган для* испытания активности брадикинина (кишечник крысы менее чувствителен). Эллиотт (1960—1961) выделил брадикинин из глобулина сыворотки свиньи, обработанного трипсином, применив противоточное распределение, хроматографию и электрофорез на бумаге. Из определения аминокислотного состава и из расщепления по Эдману выведена-структура октапептида I: 2.5.3. Противоточное распределение Проходят стадию опытной проверки новые методы разделения углеводородов: метод противоточного распределения, метод разделения при помощи непористых мембран и др. Рис. 7. Принципиальная схема устройства для непрерывного газо-' противоточного распределения. Проходят стадию опытной проверки новые методы разделения углеводородов: метод противоточного распределения, метод разделения при помощи непористых мембран и др. Рис. 7. Принципиальная схема устройства для непрерывного газо-' противоточного распределения. На практике используют автоматические приборы для распределения с несколькими сотнями распределительных ячеек (ступеней). Особенно широкое применение метод противоточного распределения получил в химии природных соединений и в биохимии *. адсорбции (хроматография ионообменная, распределительная, бумажная, тонкослойная, газожидкостная). Для очистки и выделения веществ применяют также методы противоточного распределения, молекулярной перегонки. Наши современные знания в области химии лишайниковых красителей обязаны работам Муссо1 (1955—1961). Методы, применявшиеся раньше для очистки орсеина, оказались недостаточно эффективными. Применяя распределительную хроматографию на порошкообразной целлюлозе или на кремнеземе, удалось выделить более 12 компонентов. Метод противоточного распределения Крэйга менее пригоден для препаративного разделения, но очень ценен для установления однородности препаратов, полученных после хроматографической очистки. Спектрографическое сравнение с модельными соединениями в сочетании с изучением продуктов разложения и синтетическими экспериментами привело к заключению, что эти пигменты являются производными феноксазона-2. Строение некоторых из них показано на схеме: 30,Зг Распределение жирных кислот в природных глицеридах растительного происхождения.—Благодаря двум недавно сделанным открытиям наши представления о жирных кислотах природных глицеридов значительно расширились. Речь идет о разделении природных глицеридов с помощью метода противоточного распределения (Даттон, Шолфилд и сотрудники, 1956) и об использовании панкреатической липазы, которая предпочтительно гидролизует ацильные группы, присоединенные к двум первичным гидроксилам глицерина, но не затрагивает '2-мо1ноглицерид (Маттсон, Сейвери, Таттини, 1956—1958). На основании анализа многочисленных опытных данных Ганстон вывел следующие общие положения. При биосинтезе глицеридов прежде всего а-цилируется (преимущественно ненасыщенными С^-кислотами) вторичная гидроксильная группа глицерина при С2. После этого аци-лируются и первичные гидроксильные группы при Q и Сз, причем в реакциях могут принимать участие все другие жирные кислоты, в том числе и некоторые ненасыщенные С!8-кислоты, непригодные для аци-лирования гидроксильной группы при Са- В пределах этих ограничений распределение ацильных групп для каждого углеродного атома глицерина носит статистический характер. Биосинтез, по-видимому, включает блокировку обоих первичных гадроксилов фосфатными группами (соединение I) или циклическим фосфатом, затем следует ацилирова'ние гидроксила при С2 ненасыщенными жирными кислотами и последующее дефосфорилирование и ацилирование до триглицеридов III: СН2ОРО(ОН)2 СН2ОРО(ОН)2 тавались неизменными. В 1952—1953 гг. Селмер1 и Соломоне выделили чистое соединение и доказали его строение. Концентрирование антибиотика проводилось методом противоточного распределения (аппарат на восемь ячеек) разбавленного раствора антибиотика между хлороформом и холодным 2%-ным фосфатным буфером рН = 7 в атмосфере азота. В конечном итоге антибиотик был получен в виде бесцветных игл, которые в запаянном капилляре в атмосфере азота разлагались со взрывом при температуре около 75°С. Повторная перекристаллизация при низких температурах не привела к изменению ультрафиолетового спектра поглощения и не повысила стойкость антибиотика при нагревании. Инсулин сильно агрегирован в 0,9%-ном растворе при рН = 7, но в очень разбавленных растворах при рН =2—3 он полностью диссоциирован. Молекулярный вес инсулина, определенный (различными физически* ми методами, равен 12000, однако определение, .проведенное химическим методом, показало ошибочность этой цифры. Харфенист и Крейг3 фракционировали инсулин методом противоточного распределения и показали, что кривая распределения соответствует идеальной для однородного вещества. В дальнейшем (1952) они подобрали условия частичной реакции белка с динитрофторбензолом, разделили продукты реакции распределительной хроматографией и, исходя из коэффициента экстинк-ции при 350 ммк (для монодинитрофенильного производного) и из кривой распределения, нашли значение молекулярного веса, равное 6500. Несколько близких 'пептидов, обладающих антибактериальными свойствами, были выделены из штамма почвенного микроорганизма Bacillus brevis (Дюбо1, 1940). Они подразделяются на две группы — тироцидины и грамицидины, отдельные представители которых были выделены в относительно чистом виде путем противоточного распределения. Наиболее широко изучен грамицидин-С (С — советский), соединение, впервые описанное русскими исследователями. Это циклический декапептид, имеющий структуру цикло-(1-вал — L-орн — L-лей — D-фен — L-npo)2.  Протекают одновременно Протекают синхронно Промышленных продуктов Противоположные конфигурации Противоположно направленных Противоточной экстракции Проточной установке Протонные растворители Протонной подвижностью |
- |
Навигация