|
|
|
Главная --> Справочник терминов Свободные аминокислоты б) Финилтиогидантоиновый метод (Эдман). При действии фенилизотиоцианата (фенилгорчичного масла) на свободные аминогруппы пептидов и белков образуются соответствующие производные тиомочевины. Обработка их соляной кислотой приводит к отщеплению N-концевой аминокислоты в виде 2-фениламинотиазолинонового производного, легко изомеризующегося в фенилтиогидантоин, который может быть выделен и идентифицирован. Остаток молекулы пептида или белка может быть снова подвергнут тем же превращениям, в результате чего отщепляется в виде фенилтиогидантоина следующая аминокислота. Так как реакция протекает почти количественно, этим способом удается отщепить один за другим до 10 остатков аминокислот и определить тем самым их последовательность. Ф'ренкель-Конрат и Леонис разработали микроаналитическое видоизменение этого метода, б) Триптические ферменты, трипсин (в поджелудочной железе). Наиболее активны в слабощелочной среде; гидролизуют природные белки, продукты их расщепления пепсином, а также высшие пептиды. В поджелудочной железе присутствуют различные протеолитические ферменты, действующие в слабощелочных и нейтральных растворах, в том числе пепсин поджелудочной железы, карбоксиполипептидазы, аминополипептидазы и дипептидазы. Дипептидазы и аминополипепти-дазы действуют только в том случае, если субстрат имеет свободную аминогруппу, с которой эти ферменты связываются, вероятно, посредством альдегидных или кетонных групп (образование шиффовых оснований). Карбоксиполипептидаза реагирует лишь с полипептидами, имеющими карбоксил, и только в том случае, если эта карбоксильная группа принадлежит определенной аминокислоте, например тирозину или тритофану, или же если свободные аминогруппы полипептида аци-лированы (бензоилированы). В связывании дипептидазы с субстратом участвуют также NH-группы. При избытке водородных ионов все свободные аминогруппы белка превращаются в положительно заряженные аммониевые группировки (ср. с диссоциацией аминокислот, стр. 282); белковые молекулы в этих условиях являются катионами и при пропускании тока через кислый раствор белка переносятся к катоду. При избытке же гидроксильных ионов диссоциируют все свободные карбоксильные группы белка, молекулы его приобретают отрицательные заряды, т. е. становятся анионами, и под действием тока переносятся к аноду. Простейшим из используемых ацилирующих реагентов является фосген (карбонилхлорид). Его вводят в реакцию с разнообразными ароматическими аминами, в том числе и с красителями, содержащими свободные аминогруппы, получая симметрично замещенные производные мочевины: Реакция экзотермпчна, и так как отвод тепла из большой массы затруднителен, то температура постепенно поднимается, увеличивая ее скорость; реакция сопровождается подкислением мелассы, что вызывает инверсию сахарозы и накопление моносахаридов — одного из необходимых компонентов. В мелассе содержится значительное количество аминокислот, кроме того, некоторые промежуточные продукты реакции сохраняют свободные аминогруппы. Таким образом, между скоростью реакции и образующимися продуктами имеется положительная обратная связь, т. с. реакция носит автокаталитический характер. вых производных, имеющих свободные аминогруппы, например, адени- лиза Эллиот ацшшровал свободные аминогруппы при рН5. ной рН до добавления реагента, то свободные аминогруппы, Лейкооснования, содержащие свободные аминогруппы, часто окисляются лишь с большим трудом ; в этом случае их сначала ацетшшруют, после чего реакция окисления упомянутыми выше перекисями идет вполне гладко. Например, это относится к окислению тетраметилди-аминодифенил-0-аминофенилметана 46° или тетраметилдиаминодифе-ниламинотолилметана 4Я. В разбавленном растворе, особенно в ацетоне, в присутствии большого количества поваренной соли и разбав- основных кислот с цепью из 4 и 5 атомов углерода, например гемипи-новая 761 и бутантетракарбоновая 762 кислоты, которые дают при действии пятихлористого фосфора соответственные ангидриды, а также некоторые пиридинкарбоновые кислоты и кислоты с конъюгированными двойными связями, содержащие негативные заместители (СООН, СО, ОН. ССН6 и т. Д.) в й-положении к карбоксилу 7Б3. Необходимо отметить, что алкогольные оксигруппы, кетоно- и альдегидогрушы и свободные аминогруппы также реагируют с пятихлористым фосфором. Избирательное окисление спиртовых гидроксильных групп. Избирательное окисление гидроксильных групп в моносахаридах и их производных осуществляется действием кислорода в присутствии платиновых катализаторов *. При каталитическом окислении моносахаридов, как И при действии других окислителей, в первую очередь подвергается окислению полуацетальная группа. Для защиты этой группы моносахарид превращают в гликозид или какое-либо другое производное, в котором аномерный центр закрыт. Соединения, содержащие свободные аминогруппы, полностью дезактивируют платиновые катализаторы в реакции окисления27, поэтому аминогруппу в аминосахарах также необходимо защищать, например введением карбобензоксигруппы. В цитоплазме молекула и-РНК укладывается на поверхность рибосом. Одновременно и независимо в цитоплазме происходит другой процесс, также имеющий важное значение для синтеза белка: молекулы т-РНК присоединяют свободные аминокислоты, активируют их и переносят к рибосомам. Каждой из 20 аминокислот, входящих в состав белков, соответствует своя т-РНК, со своей специфической последовательностью чередования нуклеотидов. Нужные для данного белка аминокислоты, доставленные в рибосому молекулами т-РНК, устанавливаются в нужной последовательности при помощи молекулы и-РНК, играющей роль шаблона, после Но единственным доказательством служит образование трет-бу-тиловых эфиров 3-нитрофталевой и 2, 4, 6-тринитробензойной кислот (выходы 85 и 22%). Защита карбоксильной группы в виде трет-бутиловых эфиров удобна ввиду высокой устойчивости производных к гидролизу, аммонолизу и гидрогенолизу. Свободные аминокислоты превращают в mpem-бутиловые эфиры, применяя большой избыток У. к. б. э. (1 : 100) и небольшой избыток хлорной кислоты [3]. Азотистые вещества. Азотистые вещества здорового зрелого зерна состоят главным образом из белков, которых может содержаться от 7 до 25 %. Свободные аминокислоты, амиды и пептиды присутствуют в очень небольших количествах. Лишь в зерне ржи их несколько больше, что, по-видимому, и объясняет благотворное действие ржи на дрожжи, при добавлении ее в дрожжевое сусло. Содержание небелкового азота (включая аммиачный) составляет в среднем 2%. В недозрелом, подвергшемся самосогреванию, и проросшем зерне содержание аминокислот увеличивается. Карбобензилоксиглицин при действии на него N-этклпипе-ридипа и хлорокиси фосфора в тетрагидрофуране не вступал в реакцию с натриевой солью глицина {?8]. Повторная попытка применить хлорокись фосфора в неводных растворителях и использовать эфиры аминокислот, а не свободные аминокислоты, показала, что синтез пептидов возможен. Получено 15 промежуточных соединений для синтеза пептидов с выходами от 62 до 95% [130]. Особый интерес представляет получение метилового эфира карбобензилокси-Ь-оксипролил-Ь-триптофана. Это соединение было получено с выходом 75% в стеклообразном состоянии, но после омыления и гидрогенолиза образовался кристаллический Ь-оксипролил-Ь-триотофан. По-видимому, сульфгид-рильные группы окисляются хлорокисью фосфора в присутствии третичного амина, что препятствует ацилированию такого соединения, как, например, метиловый эфир цистеина, а-аминоацил-дихлорфосфатами. Азотистые вещества состоят главным образом из белков, содержание которых может изменяться от 7 до 25%. Свободные аминокислоты, амиды, пептиды найдены в незначительных количествах. Содержание небелкового азота в среднем достигает 2%. Во ржи, а также зерне недозревшем, проросшем, подвергшемся самосогреванию, количество аминокислот возрастает. если применять свободные аминокислоты [170]. Свободные аминокислоты выделяют, пропуская раствор соляно- Свободные аминокислоты не восстанавливаются. Восстановление удается с их эфирами, если на сильно охлажденный посредством охладительной смеси и постоянно кислый (НС1) раствор последних действовать амальгамой натрия. а ц ил хлориды действием пятихлористого фосфора «* или еще удобнее — хлористого тиснила 222, в то время как свободные аминокислоты только благодаря особым приемам Э. Фишера (встряхивание с пятихлористьгм фосфором в хлористом ацетиле223 и т. Д.) могут превращаться в хлорангидриды. Фталимидоацшшюриды со своей стороны легко превращаются при действии аммиака (аминов) в амины (алкиламины). Наконец, они могут, как было показано в первом ряде примеров, превращаться в аминокетоны*8*. На том же основании соли аминокислот и сильных оснований ацилируются легче, чем свободные аминокислоты^ и сила нейтрализованных оснований имеет влияние на введение ацила и скорость; ацилирования таким образом, что, например, калиевые соли обычно легче ацилируются по этому способу, чем натриевые, поскольку не возникает каких-нибудь задерживающих моментов из условий равновесия. Если же основные свойства основания проявляются только в присутствии воды, то влияние на ацилнрование сказывается сильнее в присутствии воды, чем без воды. Поэтому, если средства не разлагаются быстро водой, то ацилиро-водного раствора аминосоединений имеет преимущество перед ацилированием в отсутствие воды. Азотистые вещества состоят главным образом из белков, содержание которых может изменяться от 7 до 25%- Свободные аминокислоты, амиды, пептиды найдены в незначительных количествах. Содержание небелкового азота в среднем достигает 2%. Во ржи, а также зерне недозревшем, проросшем, подвергшемся самосогреванию, количество аминокислот возрастает.  Соответствующих циклических Соответствующих гидроперекисей Схематически представлены Соответствующих катализаторов Соответствующих непредельных Соответствующих параметров Соответствующих превращений Соответствующих растворителях Соответствующих соединений |
- |
Навигация